無論光度計,色度計或分光光度計,基本結(jié)構(gòu)原理都是類似的。它們由光源,單色器,狹縫,吸收杯和檢測器系統(tǒng)組成。
、光源
良好的光源需要高發(fā)光強度,明亮穩(wěn)定,光譜范圍寬,使用壽命長等優(yōu)點。幾乎所有的光度計都使用調(diào)節(jié)鎢絲燈(鎢燈)。 它適合在340-900nm光源范圍內(nèi)使用。更先進的可見分光光度計加上穩(wěn)壓氫燈(氫燈)。 適用于對光源進行200-360nm紫外光譜分析。
二、單色光器
分光光度法測定物質(zhì)的吸光度需要在特定波長下進行。單色器的效果是根據(jù)需要選擇特定波長范圍的單色光。在實際工作中難以選擇單波長的光。所謂的單色光是指在該波長下以及在發(fā)射方面較少能量的相鄰長和較短波長范圍內(nèi)的大發(fā)射。單色光的波長范圍越窄,儀器的靈敏度越高,測量結(jié)果就越可靠。
簡單的單色光是在光電比色計上使用的濾光器(玻璃的某種顏色)。由于光譜范圍較寬,因此光電色度計的分辨率較差,但對比度顏色分析仍可以得到更令人滿意的結(jié)果。棱鏡衍射光柵是種好的單色儀。它們可以在寬光譜范圍內(nèi)分離相對單的波長。
三、狹縫
通過單色儀發(fā)射的光的強度可能太強或太弱以促進進步的檢測。狹縫是由光路上的對擋板形成的狹縫。通過調(diào)節(jié)狹縫的大小來調(diào)節(jié)入射單色光強度和入射光以形成平行光以滿足檢測器的需要。光電比色計的狹縫是固定的,上海精科光度計和上海精科可見分光光度計的狹縫尺寸是可調(diào)的。
四、吸收杯
吸光杯也稱為樣品杯,光度測量系統(tǒng)是重要的部分之。在可見光范圍內(nèi)測量使用光學玻璃吸收杯,在紫外范圍內(nèi)測量使用石英吸收杯。注意保護吸收杯的質(zhì)量是獲得良好分析結(jié)果的重要條件之。要使用粗糙的硬質(zhì)材料接觸吸杯,不能用手指抓住杯子的光學表面的吸收; 用后用水沖洗,不要離開測定液體,特別是蛋白質(zhì)和核酸溶液。
五、檢測器系統(tǒng)
諸如硒光伏電池,光電管或光電倍增管的光伏元件通常用作光接收器,以將通過吸收杯的光的能量轉(zhuǎn)換為電能。 然后進步使用適當?shù)姆椒▉頊y量產(chǎn)生的電流。 帶有硒光伏電池的光電比色計用于接收器。 硒光伏電池具有低的光靈敏度。 它不能檢測非常弱的光的強度。 并且對波長為270nm以下和700nm以上的光波不敏感。
更復(fù)雜的分光光度計是真空光電管或光電倍增管作為接收器,并使用放大器件來提高靈敏度。盡管窄單色光能量的光譜比寬范圍弱得多,但是具有靈敏檢測系統(tǒng)的該放大電路仍然可以被精確地檢測。
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